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　　實驗干貨：ELISA洗板操作要點

　　準(zhǔn)確儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA結(jié)果準(zhǔn)確關(guān)鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實驗中一般有5次加樣，即加標(biāo)本、加檢測抗體、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液。下面BUNSEN本生小編詳解如下：

　　1、實驗室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會導(dǎo)致最后讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來誤差。

　　2、加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液體，避免加在孔壁上，不可產(chǎn)生氣泡。

　　3、加樣時避免液體濺出，如有樣本濺出，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄。

　　4、如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應(yīng)記錄實驗。

　　5、每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個孔顯色時間相同。

　　ELISA實驗通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。因此，不嚴格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 洗滌是ELISA實驗操作最多一個步驟，如何洗板呢?

　　1、BUNSEN本生ELISA 洗液需要20倍稀釋，配置時用新鮮無污染的蒸餾水或去離子水現(xiàn)配現(xiàn)用。洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。

　　2、垂直倒液，迅速、干脆，重復(fù)2-3次，不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來倒液體。

　　3、倒液后將酶標(biāo)板放在吸水紙拍干。用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導(dǎo)致洗板不干凈，結(jié)果偏高或偏低，重復(fù)孔的數(shù)值也會相差很大。

　　4、每孔加300uL洗液，太多將溢出孔外污染相鄰的孔。特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度孔流串到低濃度孔或空白孔，其造成的交叉污染將無法洗掉，背景增高。

　　5、加入洗液浸泡30s。洗板時間太短，洗滌效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。

　　6、每次拍板不要重復(fù)在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟;拍板不宜過輕，否則拍不干凈，拍板不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，最后一次一定要扣干凈。

　　7、不管用多道加樣器、洗瓶、吸管，還是洗板機，嚴格按照說明書操作不要減少洗滌體積、洗滌時間和次數(shù)。

　　8、扣干后的酶標(biāo)板立即加液，不能干板太久。

　　注：以上資料僅供參考，具體產(chǎn)品信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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